尊龙凯时-人生就是博的人B细胞淋巴瘤OCILy19细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：初次建议1:2传代，传代频率为每两天更换培养液。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，并留作对比培养。若对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基以确保细胞的最佳状态。

二、细胞处理流程

收到细胞后，待培养至良好状态，灌满完全培养液并封闭瓶口是最佳运输方式。收到细胞后，请用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后放入超净工作台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并记录不同倍数（最好40x、100x、200x）的照片，前三天的照片为重要售后依据。如未提供照片，则默认收到状态良好。（传代后，建议一瓶使用本公司提供的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，换液后请松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将完全培养液收集至离心管中，保留5 ml培养基置于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，便可进行传代。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜观察细胞消化状态，若大部分细胞变圆并脱落，轻轻敲打培养瓶后加入5 ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞至完全脱落后，吸出悬液，转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2 ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml，待细胞回缩变圆后加入5 ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1 ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管中；
4. 将冻存细胞放入-80℃冷冻箱，如需转入液氮罐中，需在-80℃存放至少24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5 ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能因附着不牢在运输过程中出现脱落情况，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，沉淀后可加入胰酶1-2 ml，轻轻吹打，重悬，并消化1-2分钟后，再加5 ml完全培养基以终止反应。随后再次离心，弃去上清，补加1-2 ml完全培养基重悬，并按1:2比例分瓶传代（两个T25），最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题可重发的情况及判定标准包括：
1. 运输途中出现细胞丢失、容器破损、培养液严重泄漏等情况，均可重发；
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货后复苏24小时内大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰发货细胞复苏后或常温发货细胞静置但未开封出现污染，均可重发；
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未在3天内告知的问题将视为产品合格。4-7天内出现问题并提供收到细胞前3天的照片及详细操作步骤的，若技术人员判定为我方责任，则会重发。若判定为责任双方共同承担，需协商处理或按合同价的50%收费重发。

2) 细胞出现问题不予重发的情况包括：
1. 客户自身造成的细胞污染，不予重发；
2. 客户不正确操作导致细胞状态不良，不予重发；
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不予重发；
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天照片，亦不予重发；
5. 细胞在培养过程中经过其它处理的，不予重发；
6. 收到细胞2天内未告知的问题，不予重发；
7. 视具体情况而定。