紫外-可见吸收光谱法，也称为紫外-可见分光光度法，主要用于研究分子在190nm至750nm波长范围内的吸收光谱。这一分析方法基于物质分子对光的选择性吸收现象。紫外-可见吸收光谱的形成源于分子外层价电子的跃迁，其吸收光谱属于分子光谱的一种。

紫外吸收法测定蛋白质含量原理-尊龙凯时-人生就是博

实验目的

本实验的目标是：1. 学习紫外分光光度法如何测定蛋白质含量的基本原理；2. 掌握运用紫外分光光度法进行蛋白质含量测定的实验技术；3. 熟悉UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及其基本构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法的基本原理在于探究分子在特定波长范围内的光吸收特性。通过比较未知纯化合物与已知标准物质的吸收光谱特征来进行定性分析，并使用朗伯-比尔定律进行定量分析。该定律表明，在恒定波长λ和光程b的情况下，浓度c与吸光度A成正比。

在定性分析中，通常采用光谱比较法，比较未知样品吸收峰的数量、位置及形状与标准样品的差异。

定量分析依赖于朗伯-比尔定律，表达为 A=lg(I0/I)=εbc。在特定浓度范围内，色素的吸光度与其浓度呈线性关系，因此可以通过测定溶液在特定波长下的吸光度来计算物质的浓度。通常选择最大吸收波长λmax以提高灵敏度进行测量。

所使用的仪器为分光光度计，主要由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示器组成。通过光源发出的复合光经过单色器进行分光，从而获得所需波长的单色光，随后经过样品池进行吸光度的测量。

在本实验中，使用紫外分光光度法测定蛋白质含量的基本原理是：蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基含有共轭双键，使其在275-280nm处具有明显的吸收峰。在一定浓度范围内，蛋白质在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比。

在存在核酸类物质干扰时，使用280nm测量蛋白质含量可能会受到影响。核酸在260nm处的吸收强度明显高于280nm，因此可以通过两者吸光度的差异来修正蛋白质测定结果。常用公式为：蛋白质浓度（mg/mL）= 145A280 - 074A260。

启动实验设备，选择光度测量，校零，并制作标准曲线以准备后续的样品测定。

取待测蛋白质溶液进行稀释后，按照相同的测量方法获取吸光度值。进行平行测定以提高数据的可靠性。

通过绘制吸光度与波长的曲线，找到最大吸收波长λmax，并绘制标准曲线，以计算蛋白质的实际含量。

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