### RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南

尊龙凯时-人生就是博为您提供RFL-6大鼠成纤维细胞的详细培养说明。本文将重点介绍细胞的培养条件、处理方法、传代步骤及注意事项。

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：RFL-6大鼠成纤维细胞

**生长特性**：该细胞系为贴壁生长。

**冻存条件**：使用无血清冻存液（货号：C7001）进行细胞冻存。

**培养体系**：DMEM+10% FBS + 1% 双抗。

**传代方法**：首次传代建议比例为1:2，传代后每两天更换培养基。

**备注**：收集培养基时请使用无菌离心管，若比较培养效果不佳，可选择购买我们的完全培养基。

#### 二、细胞处理方法

收到细胞后，请在良好的状态下加入完全培养液并封好瓶口，这是确保细胞健康的最佳方式。收到细胞后使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞稳定。

建议使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（最好为40x、100x和200x各一张），前三天的照片将作为售后支持的重要依据。如未提供照片，将默认为收到状态良好。

在培养瓶盖口处松开盖子以保留气体交换，建议使用原瓶培养基和自配培养基分别进行对比培养。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代**：

1. 如果细胞未达到80%汇合度，将培养基收集至离心管中，并保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。

2. 如果细胞密度超过80%，则进行传代，具体步骤如下：

[1] 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS冲洗1-2次。

[2] 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落。

[3] 轻敲培养瓶，立即加入5ml以上完全培养基停止消化，轻轻吹打以使细胞完全脱落。

[4] 将细胞悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml完全培养基帮助重悬。

[5] 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

**b、细胞冻存**：

[1] 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。

[2] 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液停止消化。

[3] 将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

[4] 弃去上清后添加1ml无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后移入冻存管中。

[5] 直接放入-80℃冰箱进行冻存，后期转入液氮罐前需在-80℃冰箱存放至少24小时。

**c、细胞复苏**：

[1] 从液氮中取出冻存管时请佩戴防护面具，快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

[2] 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟。

[3] 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，保持在37℃、5% CO2培养箱内。

[4] 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中，细胞可能存在贴壁不 stevig 的情况，导致细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多，可以将养液收集至离心管，并进行相同的重悬和消化处理后再进行传代。

#### 五、售后条款

1）对于细胞出现问题的重发情况，包括：

[1] 如果细胞在运输过程中丢失、瓶身破损或严重漏液，均可重发。

[2] 如出现污染问题，需在收到产品48小时内提交真实实验结果以供核实后重发。

[3] 对于常温发货的细胞，在静置24小时后如复苏后发现大部分细胞未存活并提供真实细胞状态的照片，也可申请重发。

[4] 污染情况也可通过实时报告进行核查并重发。

对于其他未在条款内列明的问题，将视具体情况商议处理。

如需更多信息或有任何其他问题，请联系我们。尽享尊龙凯时-人生就是博的优质服务！