在前一篇关于抗体基础知识中,我们探讨了IgG的可变区结构域(Fab区)如何特异性识别并结合目标分子,从而展现出作为检测试剂的潜力。然而,要使抗体真正实现检测试剂的功能,抗体与待测分子结合后,还需产生光信号或电信号,以便于检测设备进行识别。在本章中,我们将介绍抗体基础上的常见免疫检测技术的基本原理。
免疫检测的核心原理是抗原与抗体之间的特异性结合。抗原是能够激活免疫系统的物质,通常为外源性分子或病原体的表面分子,而抗体则是由免疫系统产生的,用于识别和结合抗原的蛋白质。这种结合具有高度特异性,正是免疫检测技术得以应用的基础。
为了使抗体成为有效的免疫检测试剂,其结合还需具备若干特性。抗体通常为单分子蛋白,体积小,所结合的靶标分子也多为微小分子,肉眼难以观察。因此,为了对抗体检测结果进行定量和定性分析,必须将结合信息转化并放大为光信号或电信号。信号放大在免疫检测中至关重要,它通过增强信号强度提高检测灵敏度。常见的信号放大方式包括色素反应、荧光信号和电化学信号等。
免疫检测中的标记物是将抗原-抗体反应转化为可检测信号的关键工具。常用的检测标记物包括酶标记、荧光标记、化学发光标记和电化学标记等,每种标记物都有其独特的优缺点和适用场景:
- 酶标记: 常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),通过催化底物反应生成可见色素,具有操作简便和成本低的优势。
- 荧光标记: 使用荧光染料对抗体进行标记,灵敏度高、分辨率好,能够实现多重检测,但对光源干扰敏感,需要特定设备检测。
- 化学发光标记: 通过化学反应产生光信号,通常灵敏度极高,信号稳定,但检测成本相对较高。
- 电化学标记: 实时检测电流或电压变化,常见于表面等离子体共振(SPR)技术,虽然检测迅速,但技术复杂,操作难度较大。
抗体、检测标记物与检测仪器共同构成了免疫检测系统。灵敏度、特异性、准确性和重复性是评估免疫检测技术的重要性能指标:
- 灵敏度:指检测方法能够识别目标抗原的最低浓度能力,灵敏度越高,能在更低浓度下有效识别目标抗原。
- 特异性:指检测方法区分目标抗原与非目标物质的能力,高特异性可减少假阳性率。
- 准确性:指检测结果与真实值之间的一致性,涵盖抗原的正确识别与浓度的定量准确性。
- 重复性:指在相同条件下对同一样本进行多次检测时,结果的稳定性与一致性。
以上是抗体及免疫检测技术的概述,接下来我们将介绍具体的免疫检测技术。尊龙凯时-人生就是博提供多种品牌的蛋白、抗体及各类ELISA检测试剂盒,涵盖多种生物物种(如小鼠、大鼠),满足您的研究需求。